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1995年，马思纯出演了个人的首部电影《三个人的冬天》。2000年，马思纯参演了个人的首部电视剧《大宅门》，并在剧中饰演了少年白玉婷。高一时马思纯随妈妈蒋文娟到北京定居，从那以后便一直和妈妈住在一起。

2007年，马思纯因担任饶雪漫小说《甜酸》的书模而被更多人所认识 。高考之前，已经积累了一些演戏经验的马思纯报考了北电导演系，但并未成功。随后，她听从妈妈的建议考入了中国传媒大学的播音系。大二的时候，马思纯被沈严导演挑中出演电视剧《爸爸我怀了你的孩子》的女一号，她他因此正式进入演艺圈发展 。2008年，马思纯主演了正式出道演艺圈的首部作品，她与郭晓冬搭档主演了根据网络小说《爸爸我怀了你的孩子》改编的都市爱情剧《恋人》，并在剧中饰演了敢爱敢恨的女主角思纯 ；同年，马思纯还与檀健次、莫文蔚、蒋雯丽共同出演了电影《秘岸》。2009年，马思纯又出演了蒋雯丽执导的剧情片《我们天上见》。

2011年，马思纯与胡歌、陈柏霖、陈意涵合作出演了都市时尚剧《摩登新人类》，并在剧中饰演了知性聪慧的完美小姐温雪 。

2012年，马思纯与范植伟搭档主演了现代情感电影《岁月无声》，并在剧中饰演了女主角杨朵朵 ，马思纯也凭借此片获得了中国电影表演艺术学会金凤凰最佳新人奖 ；随后，马思纯还与扎西顿珠搭档主演了系列都市时尚单元剧j《刷新3+7》之《小城故事多》，并在剧中饰演了如丁香花般的美丽女孩小苗 。