重组质粒后为什么还需要双酶切，PCR鉴定并测序分析

2023-01-10 21:50

1个回答

2023-01-11 02:14

重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。
测序是更准确的方法，一般不用而已。

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酶切后PCR一条带都没有但原质粒PCR有条带为什么

2个回答2022-09-04 08:38

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为什么质粒双酶切后显得更大了？

1个回答2022-10-31 22:29

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连接转化后提质粒做酶切，可以切出带，做质粒PCR却P不出来，为什么

1个回答2023-05-22 05:30

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质粒双酶切后怎么会这个样子

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因为转化过程你没出来好加点 kml 再转化提质后分别切2 这样就正确了

双酶切质粒后电泳的问题

2个回答2022-08-31 16:57

很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了，因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。

请问为什么质粒测序失败，但是以质粒为模板扩增送pcr产物测序却可以

1个回答2023-03-02 12:40

我的也是这样，你的问题解决了吗

我的3个质粒测序结果都正确，但是做双酶切结果只有一个能切下来DNA片段，为什么呢?

1个回答2022-07-16 10:41

这个可能性太多了吧. 这个不好说啊.你得一个条件一个条件的排除

T4连接后对其质粒PCR条带不亮，为什么？酶切没有条带，是否连接上？

3个回答2022-10-06 22:15

很显然你的质粒没有构建成功。感觉是连接出了问题，pBI121载体很大，回收比较困难，建议你测一下回收后的浓度。如果太低的话，建议加大酶切量。121载体至少应该达到50-100ng，然后再按1:3-10...

表达质粒构建中, 做带有目的基因片段的pcr之前，需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗？。

2个回答2023-01-03 12:10

不需要酶切，直接以环形质粒为模板扩增PCR就可以。

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