基因克隆的基本步骤有哪些

2022-12-05 19:36

1个回答

2022-12-05 22:20

　　选择目的基因,并设计相应引物；
　　用引物PCR扩增目的基因片段；
　　选择合适（抗性标记、酶切位点等）的克隆载体（为了保真扩增）,并将PCR片段连接入克隆载体中；（一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连）
　　将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增；
　　从大肠杆菌中提取质粒（即前面的连接产物）,酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片段切下并与新的表达载体连接,然后再次转化入大肠杆菌中扩增,再提质粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

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