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基因克隆的方法主要有哪几种,简述各种方法的原理和用途
2022-11-27 10:41
1个回答
2022-11-27 13:18
基因克隆的方法主要有哪几种
选择目的基因,并设计相应引物;
用引物PCR扩增目的基因片段;
选择合适(抗性标记、酶切位点等)的克隆载体(为了保真扩增),并将PCR片段连接入克隆载体中;(一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连)
将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增;
从大肠杆菌中提取质粒(即前面的连接产物),酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片段切下并与新的表达载体连接,然后再次转化入大肠杆菌中扩增,再提质粒,即得到想要的目的基因片段克隆.
相关问答
怎样克隆基因或是克隆基因的一般步骤是什么?
1个回答
2022-09-09 10:50
一般情况下有两种方法:一、反转录法:用已知的单链mRNA反转录出一条单链的DNA,再用碱基互补配对原则合成双链DNA。二、用已知的蛋白质的多肽链推测出单链mRNA(一个氨基酸对应相应的密码子)上碱基的...
全文
克隆技术的原理简述
1个回答
2022-09-24 18:05
𠂆人健康人称代词
基因克隆不出来,为什么
1个回答
2022-09-01 13:52
基因克隆是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术,可概括为∶分、切、连、转、选。最终目的在于通过相应技术手段,将目的基因导入寄主细胞,在宿主细胞内目的基因被大量的复制。
基因克隆的基本步骤有哪些
1个回答
2022-12-05 19:36
选择目的基因,并设计相应引物; 用引物PCR扩增目的基因片段; 选择合适(抗性标记、酶切位点等)的克隆载体(为了保真扩增),并将PCR片段连接入克隆载体中;(一般用Taq酶的PCR产物在末...
全文
试述基因克隆载体进化过程
1个回答
2023-07-09 05:56
答案的两个要点其实就是我们做载体构建两个基本侧略。平末端连接和粘性末端连接。第一种就是采用粘性末端连接的策略。通过在你的平末端目的片段两端分别加上含EcoRI和Xhol的酶切位点的接头序列,然后用这两...
全文
你好,你克隆过未知的基因吧?我也要克隆一个未知基因。我有以下疑问:1,我克隆鱼的一个未知基因。
1个回答
2022-10-28 23:30
你这个应该比较简单吧,80%的同源性设计简并引物应该成功率是比较高的,前提是你要做的这种鱼中有这个基因。 5对够不够不好说,这东西的看运气,但是我觉的应该够了。 拿全长看怎么拿了 ,如果你PCR引物设...
全文
怎样克隆一个目的基因?
2个回答
2022-09-14 09:25
要有目的基因、引物、DNTP、去离子水、Taq酶、以合适的浓度加到离心管里,在PCR仪上克隆
基因克隆探针
1个回答
2023-07-16 07:41
这种探针是利用已知基因经过互补配对设计的单链DNA
为什么我们基因克隆老失败?
1个回答
2023-01-19 02:19
1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切。这样避免两次纯化的麻烦。我都是这么做的。 2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体? 3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?...
全文
为什么我们基因克隆老失败
3个回答
2022-09-26 19:01
1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切。这样避免两次纯化的麻烦。我都是这么做的。 2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体? 3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?...
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