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很想知道质粒构建的详细步骤?
2022-09-30 23:31
2个回答
2022-10-01 03:18
质粒的构建有很多方法,如果是PCR产物连接到T载体则使用T-A策略,如果是酶切连接刚需要T4连接酶进行连接。
你要是有天根全式金载体连接说明书就明白了。
2022-10-01 03:05
1. 通过PCR扩增目的基因片段
PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化。
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点,分别对PCR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到受体菌中(一般为DH5a),涂板,培养过夜
5. 挑取单克隆,并鉴定
挑去平板上的单克隆培养,可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆,对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序
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质粒构建、提取详细步骤?
1个回答
2022-08-13 05:16
构建载体就是把目标DNA、载体、DNA连接酶、酶的buffer放到一起,然后4度连接过夜就行了。上面各个东西的用量,你可以参考连接酶的说明书。如果你是想连T载体的话,就可以直接拿PCR产物和载体连,如...
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天龙八部里做手工的详细步骤?
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2022-09-18 14:55
结婚的步骤,越详细越好。
1个回答
2024-03-30 02:47
见面——俗话说:男大当婚,女大当嫁。小伙子到了二十岁左右,父母就张罗着托介绍人说媳妇。兴平的婚俗,是经中间人介绍后,青年男女双方,彼此要进行见面交谈。见面地点一般设在介绍人家里,或兴平县的街道、或...
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怎么当明星的女朋友?详细步骤
1个回答
2022-10-27 12:53
首先你得有颜值
我向知道发表小说要怎样做!步骤?越详细越好!十分感谢?
1个回答
2024-03-12 04:37
首先你要有腹稿,最好有故事大纲,这样比较好写 然后在网站注册会员,然后进入他们的作者专区(或名称职能类似的)注册作者号 然后一般要求一两天内交出第一章稿子 恭喜你,你成为百万网络作家的一员~
要讲解,要详细步骤
1个回答
2024-03-10 16:27
x+2x=12 3x=12 x=4 y=2x=8
怎么修建地下室,详细步骤
3个回答
2022-06-07 14:58
1.土方开挖,边挖边做边坡维护,平整场地打桩。 2.放好筏板,挖开集水坑及电梯基坑并且夯实,待准备工作弄完开始浇筑混凝土。 3.粘贴地梁下垫层第一遍防水卷材。 4.粘贴第二遍高分子复合防水卷材...
全文
怎么修建地下室,详细步骤?
1个回答
2022-09-22 07:20
盖房前先挖地下室,要根据当地地质地貌以及水文等情况,决定下挖深度以及地下室的占地面积和形状。然后再打房屋地基的时候再把地下室整个混凝土一体浇筑而成。
质粒的构建策略是什么?
1个回答
2022-08-02 04:23
天然存在的野生型质粒由于分子量大、拷贝数低、单一酶切位点少、遗传标记不理想等缺陷,不能满足克隆载体的要求,因此往往需要以多种野生型质粒为基础进行人工构建。目前实验室使用的大肠杆菌质粒大多是由少数几个野...
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