关于克隆的问题。假如我有有一个基因片段，未知序列。我可以把它连接到T载体，然后PCR

2022-06-26 17:23

PCR 用T载体PRIMER,然后测序，然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的。这个做法行么？或者别的做法，推荐下

3个回答

2022-06-26 21:37

不行~
你得先用TAQ酶讲这个片段过一个循环的PCR 这样在后面加了A才可以连T载体然后转化涂板摇菌提质粒测序

2022-06-26 21:26

T载体分两种。一种是末端带有A的典型的T载体，这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接，另一种是平末端的T载体，这种T载体末端没有A，它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接，因为你的序列是未知的，为保万无一失，建议你最好先用taq给它处理下，即末端加A然后再和含有A的T载体连接，然后再用M13测序。

2022-06-26 18:54

恩，你这是最简单的方法了。大家都是这么做的。

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